การตรวจการทำลายเซลล์โดย CTL หรือ NK cell (Cytotoxicity assay)
หลักการ
เป็นการทดสอบเพื่อดูความสามารถของ CTL หรือ NK cell (effector cells) ในการทำลาย หรือ ฆ่าเซลล์เป้าหมาย (target cells) วิธีมาตรฐานที่ใช้ตรวจคือ
51
Cr release assay ทำโดยนำ target cells มาติดฉลากด้วยสารกัมมันตภาพรังสี
51
Cr แล้วนำมาเลี้ยงรวมกับ effector cells ด้วยอัตราส่วนต่างๆ เช่น effector : target (E:T) = 100:1, 50:1, 25:1, 12.5:1, และ 5:1 เมื่อครบเวลานำไปปั่นแยกเอาเฉพาะส่วนน้ำใสซึ่งจะมี
51
Cr ที่ถูกปล่อยออกมาจาก target cells ที่แตก มาวัดปริมาณรังสีด้วยเครื่อง gamma counter (รูปที่ 7 และ 8)
รูปที่ 7 Cytotoxicity Assay by Chromium Release
รูปที่ 8 Chromium Release Assays
การอ่านและแปลผล
มีหน่วยเป็น cpm โดยนิยมคำนวณเป็นค่า % specific lysis ดังนี้
% specific lysis =
experimental release (cpm) spontaneous release (cpm)
x 100
maximum release (cpm) spontaneous release (cpm)
คำถามในห้องปฏิบัติการ
1. จงยกตัวอย่างเซลล์ที่ใช้เป็น effector cells และ target cells สำหรับ cytotoxicity assay
2. นิสิตทราบหรือไม่ว่า experimental release, spontaneous release, และ maximum release แตกต่างกันอย่างไร
^Top^
ภาควิชาจุลชีววิทยา คณะแพทยศาสตร์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย